《三葉青扦插繁殖技術規(guī)程》征求意見稿編制說明

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廣西地方標準《 三葉青扦插繁殖技術規(guī)程 》 （征求意見稿）編制說明 一、 任務來源 （一） 任務來源與項目編號 本標準是廣西壯族自治區(qū)質量技術監(jiān)督局下達的 2016 年 第 六 批廣西地方標準制定（修訂）項目計劃 （桂質監(jiān)函 [2016] 324 號文） ，項目編號為 2016廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會提出， 廣西衛(wèi)生標準化技術委員會歸口 ，廣西壯族自治區(qū)藥用植物園負責起草。 （ 二 ） 參與起草單位 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園。 （ 三 ） 主要起草人員名單及 職務或 職稱 二 、 編制 標準意義 三葉青 (為葡萄科崖爬藤屬植物，其塊根稱為蛇附子。異名：有角烏蘞莓、石老鼠、石猴子、石抱子、搜夾風、三葉扁藤、絲研 制 人 員 姓名 職務 /職稱 現(xiàn)從事 專 業(yè) 所 在單位 項 目 負責人 付金娥 副 研究員 藥用植物育種栽培 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 主 要 參 加 人 員 韋樹根 副研究員 藥用植物遺傳改良 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 黎潁菁 農藝師 藥用植物栽培 廣西壯族自治區(qū)綠色食品辦 公室 胡鳳云 助理研究員 植物保護 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 白隆華 研究員 藥用植物栽培 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 童婷婷 研究實習員 植物保護 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 楊沛奕 研究實習員 中藥學 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 1 線吊金鐘、金絲吊葫蘆、金線吊馬鈴薯等 [1]。三葉青主要分布在長江以南地區(qū)，生于陰濕山坡、山溝或溪谷旁林下，以塊根或全草人藥，為民間常用的中草藥，具有 抗病毒、 抗癌抗腫瘤 [2抗炎、鎮(zhèn)痛與解熱 [4]、保肝 [5活血祛風之功效 ，且毒副作用小，是西藥無法代替的“植物抗生素”。臨床上已廣泛用于抗癌及抗艾滋病毒、抗腫瘤 、血液病、心腦血管 等疾病。近年來，我國有多 個中藥廠都在使用三葉青作原料生產中成藥，如三葉青膠囊、三葉青沖劑、三葉青茶等 ， 并且其需求量呈 日益增長趨勢 ，加上毀壞性采收和無序管理，迫使 三葉青 野生資源遭受毀滅性的破壞 ， 其野生產量 遠遠滿足不了市場需求。 廣西作為三葉青的主產地之一，是三葉青系列中成藥的主要來源地。 韋樹根等對廣西三葉青的資源狀況進行了調查研究，發(fā)現(xiàn)廣西三葉青的野生資源已瀕臨滅絕 [7]。 由于三葉青生物學特性的特殊性，基本不產種子或產種極少，其種苗一般采用種署繁殖 、組織培養(yǎng)繁殖和 扦插繁殖；三葉青種署繁殖成本較高，且繁殖種苗 數(shù)量 有限； 組織培養(yǎng)繁殖是目前 報道最多的方法 [8但該方法僅限于實驗室，還未發(fā)現(xiàn)有大田種植的組培苗的報道； 三葉青扦插繁殖技術已有報道，吉慶勇等 [11]研究發(fā)現(xiàn)，采用 2 1000 0 10天后統(tǒng)計 成活率 ，成活率可高達 99%，說明三葉青可以 用扦插的方法進行繁殖，且該方法是目前三葉青種植行業(yè) 普遍采用的繁殖方法 。三葉青扦插繁殖 技術 ，具有繁殖成活率高， 簡便易行、 用時短 、環(huán)境污染較小等優(yōu)點。 但 由于尚 無三葉青扦插繁殖技術規(guī)范，生 產出的 扦插苗 質量 參差 不 齊 ， 其 藥材質量也不穩(wěn)定。 因此 ，為了更好 指導三 葉青扦插繁殖 ， 提高 其成活率 ， 壯大 廣西三葉青 種苗 產業(yè) ，促進區(qū)域經濟發(fā)展，提高農民收入，必要對 三葉青 扦插 繁殖 技術作進一步研究，并對 扦插 繁殖技術 的 各個環(huán)節(jié)作出規(guī)范。 經查閱《中華人民共和國國家標準批準發(fā)布公告》、《中華人民共和國地方標準備案公告》，目前中藥材三葉青扦插 繁殖技術 規(guī)范無國家標準、行業(yè)標準和地方標準。因此，本標準的制定為提供 成活率高、操作性強 的 三葉青種苗繁殖技術 提供 技術 指導，對 三葉青 種質資源保存和可持續(xù)利用具有重要意義。 三 、 標準 編制 起草及研究 過程 （一） 標準前期工作 1、 前期 技術 研究工作。 2 廣西 壯族 自治區(qū) 藥用植物園在 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科技研究計劃課題“廣西瀕危珍稀中藥材三葉青種質資源評價及繁育技術研究（重 2012116） 和 南寧市科學研究與技術開發(fā)計劃項目“廣西瀕危珍稀中藥材三葉青種質資源評價及繁育技術研究（ 20133165）等 課題資助下 ，對三葉青 資源進行了系統(tǒng)的調查、評價及繁育等方面的研究，取得了一定的成果 ，收集了 10多份 三葉青 種質資源，建立了 1畝種質 資源 圃和 種苗繁育生產示范基地 5畝 ， 篩選出總黃酮、游離氨基酸含量高、長勢旺盛、結薯早、適合于廣地地方發(fā)展的 1個優(yōu)良種質類型。共發(fā)表了“ 微波消解 — 紫外分光光法測定三葉青中游離氨基酸含量” [12]、 三葉青藥材中微量元素的分析 [13]、 廣西瀕危珍稀中藥材三葉青資源調查研究 [7]、藥用植物三葉青研究進展 [14]等多篇文章，并申請國家發(fā)明專利 2項，分別為“一種 快速測定三葉青中硒含量的方法 （ 申請?zhí)枮?已經進入二審狀態(tài) ）和一種打破三葉青種子休眠的方法（ 授權號為 前期研究項目 已取得了突破性進展，為本標準的制定 奠定 良好基礎 。此外，本研究組還 開展 三葉青扦插繁育的品種選擇、苗圃地準備、扦插、苗期管理、出圃、檔案管理 的 關鍵技術研究，試 驗結果為《 三葉青扦插繁殖技術規(guī)程 》 地方 標準 的制定提供了大量翔實的數(shù)據(jù)和實際應用驗證資料。 2、標準編制前期工作。 標準主管部門廣西壯族自治區(qū)質量技術監(jiān)督局下達2016年第 六 批廣西地 方標準制定（修訂）計劃項目 （桂質監(jiān)函 [2016]324號文）后，我們及時成立了以廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 付金娥 為主持人， 韋樹根、 黎潁菁、韋榮昌、 白隆華、 胡鳳云、童婷婷 為組員的標準編制小組，及時部署了工作方案和小組成員調研、編制工作時間安排表。 標準起草工作小組在前期研究工作以及實地調研的基礎上，對 三葉青扦插繁殖 技術 進行 系統(tǒng)總結，查閱了大量的國內外文獻資料，確定了標準的主要技術內容，形成了標準的基本構架。 編制過程中，在廣泛調查和試驗研究的同時 ， 還咨詢了相關權威專家，力爭編制工作科學、嚴謹，方法、技術路線正確。 （二）標準研究過程 1、前期研究發(fā)現(xiàn)，影響 扦插苗生產 因素有 插穗生長年限 、 扦插基質 和 生根粉的濃度 等。 插穗 成熟 程度高低對扦插苗生產影響較大 ， 2生的帶芽枝條作為插穗 ，生根率最高 ， 生長勢較強；用一定濃度的 根粉 1 號 進 3 行生根處理，有利于提高生根率；扦插苗的管護如光 照 強度 、水分等對扦插苗的存活率 均 有 較大影響 。 編制小組對 如 何提高 扦插苗 生根 率 、 存活 率 進行了多次的試驗，解決了 生根率和 存活 率低 等技術難題。 2、標準編制項目下達后，按照廣西區(qū)質監(jiān)局關于編制標準工作的要求，編制小組于項目實施期間， 通過 多 種 渠道 對 業(yè) 內 專家 進行咨詢 ，確保標準的可靠性。 3、編制小組根據(jù)標準的格式和編寫方法，按照 標準編寫格式規(guī)定《 三葉青扦插繁殖 技術規(guī)程 》廣西地方標準 “征求 意見 稿 ”。 4、 編制小組 根據(jù) 專家 們 對本標準意見征求稿 所 提出的修改意見和建議，進行了了認真分析和研究， 形成 《 三葉青扦插繁殖 技術規(guī)程》廣西地方標準 “征求意 見稿 ”。 四 、 標準 編制原則 、 依據(jù) 1、 制定本標準目的是 規(guī)范和統(tǒng)一廣西區(qū)內三葉青扦插苗的生產 ， 以 提高 桑寄生種苗的質量，并促進其在廣西的推廣應用 2、 本標準的格式和編寫方法執(zhí)行 規(guī)定。 3、 本標準的制定力求科學、準確、系統(tǒng) 、適度、可行 ， 實現(xiàn)優(yōu)質、安全、高效的目標，通過充分聽取各方意見，確保標準可以作為政府部門監(jiān)督、指導生產的依據(jù)，在實際應用上切實可行， 內容與當前 三葉青扦插繁殖技術 的實際和社會經濟狀況緊密結合，可操作性強。 五 、 標準 主要技術內容 （一）范圍 本標準規(guī)定了 三葉青扦插繁育的 品種選擇、苗圃地準備、扦插、苗期管理、出圃、檔案管理。 適用于 三葉青的扦插繁殖 。 （二）規(guī)范性引用文件 本標準引用文件包括： 285 農藥安全使用標準 [15] 5569 農業(yè)植物調運檢疫規(guī)程 [16] 8321（所有部分） 農藥合理使用準則 [17] 496 肥料合理使用準則 通則 [18] 4 532 無公害中藥材 產地環(huán)境條件 [19] （ 三 ） 主要技術內容 1、扦插品種來源 扦插品種為 三葉青 2、 產地環(huán)境 根據(jù) 無公害中藥材 對 產地環(huán)境 條件 的 要求 ，規(guī)定產地環(huán)境應符合 532（無公害中藥材 產地環(huán)境要求） 規(guī)定。 宜選擇背風向陽、土質疏松肥沃、排水良好、 3、扦插生產 技術 起草工作小組 在 上述前期幾個項目 的 資助下，針對 三葉青 扦插 繁殖技術 環(huán)節(jié)進行了系統(tǒng)的試驗驗證， 為確定 各項 主要技術指標提供了科學依據(jù)。 （ 1） 選擇 1年生、 2年生、 3年生及多年生 健壯、無病蟲害、莖粗不小于 0.2 藤 條 作為插穗。 將枝條剪成具 2個～ 3個 腋芽 、長 15 30 除葉片及葉柄。插穗上端剪為平口，下端于距芽體 4剪成斜形，切口斜形與芽體相背，要求截面 光 滑。 每 50段 藤 條整齊捆成一扎。 然后將藤條用清水處理后扦插于 壤 土中 ， 深約 為整個插穗的 2/3，插后壓緊，澆水保濕， 40指標 。不同年份插 穗對扦插枝生長的影響 見表 1。 表 1 不同年份插穗對扦插 苗 生長的影響 插穗 年份 扦穗株數(shù)/株 生根株數(shù) /株 平均生根數(shù) /條 平均根長 /均梢數(shù) /條 平均梢長 /活率 /% 1 a 100 30 0 2 a 100 68 7 3 a 100 70 0 多年生 100 69 6 由表 1 可以看出， 2~3 年生插穗和多年生插穗扦插苗的生活率比較高， 1 年生插穗成活率比較低，僅有 30%。考慮到時間、勞力、經濟等方面的原因，故選擇以 2~3 年生藤條作為插穗。 （ 2）將插穗用 多菌靈溶液浸泡 20 行消毒。 （ 3）扦插基質選擇。選擇壤 土和河沙最為基質，篩選適合三葉青扦插繁殖的基質。結 果見表 2。 5 表 2 不同基質對三葉青扦插苗生長的影響 基質 扦穗株數(shù)/株 生根株數(shù) /株 平均生根數(shù) /條 平均根長 /均梢數(shù) /條 平均梢長 /活率 /% 河沙 100 53 0 壤 土 100 72 9 （ 4） 將 2~3 年生 插穗基部用 不同濃度的 根粉 1 號 或 液 進行浸泡時間處理 ，浸泡液面高于切口 1～ 1.5 泡時間為 10s，扦插黃土中 。 試驗結果表明 1 000 的 根粉 1 號 溶液的浸泡 10s 效果較佳。 結果見表 3和 表 4。 表 3 不同濃度 三葉青 扦插 苗 生長的影響 處理 () 扦穗株數(shù) （株） 生根株數(shù) （株） 平均生根數(shù)（條） 平均根長 （ 平均梢數(shù) （條） 平均梢長 （ 成活率 （ %） 對照 100 70 0 200 100 75 5 400 100 79 9 600 100 85 5 800 100 94 3 1000 100 99 7 表 4 不同濃度 三葉青扦插 苗 生長的影響 處理 () 扦穗株數(shù) （株） 生根株數(shù) （株） 平均生根數(shù)（條） 平均根長 （ 平均梢數(shù) （條） 平均梢長 （ 成活率 （ %） 對照 100 70 0 200 100 84 9 400 100 89 4 600 100 73 0 800 100 74 9 1000 100 63 6 由表 3 和表 4 可知， 從總體來說以 1 000 的 根粉 1 號溶液的浸泡 10s 效果較佳，三葉青扦插苗成活率可達 97% （ 5）扦插后控制溫度 在 25℃ ~30℃， 濕度控制在 75%以上， 遮蔭率在 70％以上。 6 （ 6） 三葉青植株抗病性強，基本無病害。但如果扦插圃出現(xiàn)大面積積水，可 能 引發(fā)三葉青根腐病、霉菌病和葉斑病 [20]。 根腐病。 根腐病主要是由木賊鐮孢病原引起，表現(xiàn)癥狀為三葉青植株根部發(fā)黑腐爛，導致整株死亡。防治根腐病措施：發(fā)病初期可以使用 50％甲基托布津可溶性粉劑 800～ 1000 倍液噴灑。 霉菌病。 在潮濕的環(huán)境中，由于三葉青生長過于旺盛或者種植密度過大， 容易造成三葉青間不通風，葉片下表面 容易出現(xiàn)白色菌絲團，嚴重時導致三葉青成片死亡。防治霉菌病措施：發(fā)病初期及時剪除病葉，并用 50%多菌靈可溶性粉劑 600～ 1000 倍液噴灑葉片。連續(xù)噴灑 3 次。 葉斑病 。 初期三葉青葉片表面 產生圓形或不規(guī)則深褐色病斑 ， 病斑不斷擴大嚴重時導致全株葉片枯死 。 防治葉斑病措施 ： 用 65％代森鋅 500～ 600 倍液或1:1:150 波爾多液防治。 4、出圃 、 包裝和運輸 一般為 出圃 時間為育苗 2 個 ～ 3 月后， 最 佳 時間為 次年 3 月～ 4 月 。出圃前一天傍晚苗床需澆透水，起苗時，人工將苗輕輕拔起，盡量挑健壯的苗，剪去過長根系統(tǒng)，并注意防曬保濕。 出圃時需在明顯處掛標簽，注明品種名稱、級別、數(shù)量、出圃日期，如一車同時裝運兩個品種，應按品種先后裝車，并做出明顯區(qū)別標志。填寫標簽時應該用不脫色的記號筆填寫。 若長途運輸，要采用 濕 布 覆蓋，用沾泥漿、吸濕劑等措施確保根部不失水，并需符合 《 5569 農業(yè)植物調運檢疫規(guī)程 》 [16]的要求。 5、 檔案 記錄 檔案 是 生產單位 在 三葉青 扦插 扦插繁殖 全過程中形成的產物，是 生產單位 實施 三葉青扦插繁殖技術 的依據(jù)和憑證，是 藥材 質量溯源的重要文件。 因此， 需 對品種選擇、苗圃地準備、扦插、苗期管理、出圃、檔案管理 等各生產環(huán)節(jié)所采取的措施進行詳細記錄，建立生產檔案。 六 、與現(xiàn)行法律 法規(guī)和標準關系 本標準（征求意見稿）制定是遵循《中華人民共和國標準化法》等國家相關的法規(guī)和強制性標準，結合地方實際情況制定出來的 ，因此，與現(xiàn)行法律、法規(guī)及強制性標準無沖突。 7 七 、 實施標準的要求和建議 標準必須是在遵循法律法規(guī)及國家相關標準的前提下，綜合 三葉青 生產企業(yè)的實際要求制定，標準必須具有法律依據(jù)及可操作性。 八 、 參考文獻 [1]國家中藥管理局《中華本草》編委會．中華本草．第 ．上海：上?？茖W技術出版社， 1999， 2962]鐘良瑞，魏克民 . 三葉青黃酮對肺癌 胞生長抑制與 路關系的研究 2014,30(1):1013] 李華美，浦錦寶，鄭軍獻等 . 三葉青乙酸乙酯提取物 對小鼠 J]2012,19(3):2294] 黃真，毛慶秋，魏佳平．三葉青提取物抗炎、鎮(zhèn)痛及解熱作用的實驗研究 [J]．中國新藥雜志， 2005,14(7):8615]楊雄志，巫軍 J]2009,25(4):2946]楊雄志 J]2008,8(2):887] 韋樹根 ,董青松 ,韋瑩等 J]. 北方園藝， 2011， 21 :1628]鐘毓倩 浙江中醫(yī)雜志 ,2007, 42(6): 363 [9]錢麗華 . 三葉青的離體快速繁殖 2008,44(1):12110]邵駿驊，邵衛(wèi)平，劉永立 . 三葉青高效快繁技術體系的建立 2015,43（ 35）： 20811] 吉慶勇，程文亮 ,華金渭 ,丁朝洪 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